Sterilisasi Alat

LAPORAN TETAP 

PRAKTIKUM DASAR-DASAR MIKROBIOLOGI AKUATIK

STERILISASI ALAT

 

Kelompok IV

Kurniasih

05051181520030

PROGRAM STUDI BUDIDAYA PERAIRAN DAN TEKNOLOGI HASIL PERIKANAN

FAKULTAS PERTANIAN

UNIVERSITAS SRIWIJAYA

2016

BAB I

PENDAHULUAN

1.1. Latar Belakang

Mikrobiologi adalah ilmu yang mempelajari tentang mikroorganisme yang  tidak dapat dilihat dengan mata telanjang untuk meneliti apa saja yang terkandung di dalam mikroorganisme. Mikrobiologi adalah suatu ilmu yang mempelajari tentang kehidupan makhluk hidup yang bersifat mikroskopik yang disebut mikroorganisme. Mikroorganisme adalah makhluk yang mempunyai ukuran sel sangat kecil dimana setiap selnya hanya dapat dilihat dengan menggunakan mikroskop. Dalam teknologi pangan, mikrobiologi juga merupakan ilmu yang sangat penting, misalnya dalam hubungannya dengan kebusukan makanan sehingga dapat diketahui tindakan pencegahan atau pengawetan yang paling tepat untuk menghindari terjadinya kerusakan. Di samping itu, mikrobiologi juga penting dalam fermentasi makanan, pengawasan mutu pangan, dan lain - lain. Alat – alat yang digunakan dalam  penelitian harus dalam keadaan steril atau bebas dari kuman, bakteri, virus dan jamur. Perlu adanya pengetahuan tentang  cara-cara atau teknik sterilisasi. Hal ini dilakukan karena alat – alat yang digunakan memiliki teknik sterilisasi yang berbeda (Dwidjoseputro, 2003). 

Steril merupakan keadaan dimana alat-alat yang digunakan sudah terbebas dari bakteri yang mengkontaminasi. Sedangkan sterilisasi adalah proses penghilangan semua jenis organisme hidup, dalam hal ini adalah mikroorganisme (protozoa, fungi, bakteri, mycoplasma, virus) yang terdapat dalam suatu benda. Proses ini melibatkan aplikasi biocidal agent atau proses fisik dengan tujuan untuk membunuh atau menghilangkan mikroorganisme. Sterilisasi didesain untuk membunuh atau menghilangkan mikroorganisme. Target suatu metode inaktivasi tergantung dari metode dan tipe mikroorganisme yaitu tergantung dari asam nukleat, protein atau membran mikroorganisme tersebut. Agen kimia untuk sterilisasi disebut sterilant (Pratiwi, 2006).

Laboratorium adalah suatu tempat dimana mahasiswa atau praktikan, dosen, dan peneliti melakukan percobaan. Bekerja di laboratorium tidak akan lepas dari berbagai kemungkinan terjadinya kecelakaan dari berbagai jenis bahan kimia baik yang bersifat berbahaya sampai yang sangat berbahaya. Selain itu, peralatan yang ada di dalam laboratorium juga dapat mengakibatkan bahaya yang tak jarang berisiko tinggi bagi praktikan yang sedang melakukan praktikum jika tidak mengetahui cara dan prosedur penggunaan alat yang akan digunakan. Manfaat dari pengenalan alat adalah untuk mencegah terjadinya hal-hal yang tidak diinginkan pada saat menggunakan alat praktikum sedang berlangsung. Sedangkan kegunaan Alat-alat sterilisasi adalah untuk membebaskan suatu bahan atau alat lain dari mikrobia yang tidak diinginkan pada saat praktikum.  

Alat – alat yang digunakan dalam  penelitian harus dalam keadaan steril atau bebas dari kuman, bakteri, virus dan jamur. Perlu adanya pengetahuan tentang cara-cara atau teknik sterilisasi. Hal ini dilakukan karena alat – alat yang digunakan memiliki teknik sterilisasi yang berbeda. Suatu laboratorium harus merupakan tempat yang aman bagi para pemakainya yaitu para praktikan, aman terhadap setiap kemungkinan kecelakaan fatal maupun sakit ataupun gangguan kesehatan lainnya. Kecelakaan yang terjadi disuatu laboratorium merupakan tanggung jawab moral dalam keselamatan kerja .

Setiap alat memiliki kegunaan dan fungsinya masingmasing. Dalam penggunaannya ada alat-alat yang bersifat umum dan ada pula yang bersifat khusus. Peralatan umum biasanya digunakan untuk suatu kegiatan reparasi, sedangkan peralatan khusus lebih banyak digunakan untuk suatu pengukuran atau penentuan. Sterilisasi adalah proses atau kegiatan membebaskan suatu bahan atau benda dari semua bentuk kehidupan (termasuk virus). Semua material sebagai subjek proses ini disebut sebagai bahan yang steril. Istilah steril tidak menggambarkan suatu bahan mutlak steril namun lebih tepatnya hampir tidak terdapat kehidupan karena steril tidak dapat dipastikan. Ketika sejumlah mikroorganisme terpapar terhadap suatu perlakuan sterilisasi seperti panas, mereka tidak akan mati secara langsung spontan melainkan akan mati secara bertahap. Secara teoretis dampak sterilisasi terhadap jumlah mikroorganisme yang homogen yaitu akan mematikannya secara eksponensial dengan kecepatan yang seragam. Agen kimia untuk sterilisasi disebut sterilant.

1.2. Tujuan

Mengetahui metode sterilisasi dan penerapannya di laboratorium mikrobiologi.

1.3. Kegunaan

Adapun kegunaan dari praktikum Dasar - Dasar Mikrobiologi Akuatik ini adalah agar mahasiswa mengetahui cara sterilisasi alat yang ada di dalam  laboratorium baik dari alat - alat yang digunakan serta media yang dipakai dalam mikrobiologi akuatik.

BAB 2

TINJAUAN PUSTAKA

2.1. Pengertian dan Tujuan Sterilisasi

Sterilisasi adalah proses dimana suatu objek, material atau lingkungan di jadikan steril. Steril adalah kondisi benda atau objek yang bebas dari segala jenis sel hidup, spora dan virus. Metode sterilisasi dapat di kategorikan menjadi tiga, yaitu metode fisik, metode kimia, dan kombinasi fisik dan kimia. Metode fisik adalah metode yang mencakup pemanasan, pembakaran, penyaringan, penggunaan radiasi, dan pengguna gelombang ultrasonik. Pemanasan adalah metode yang paling lazim digunakan. Metode sterilisasi kimia menggunakan disinfektan atau mikrosida untuk membunuh mikrobia(Soerawidjaja, 2005). Sterilisasi adalah proses atau kerja untuk membebaskan suatu bahan seperti medium pertumbuhan mikroba atau peralatan laboratorium dari semua bentuk kehidupan (Iman, 2010).

Salah satu teknik sterilisasi yang umum digunakan adalah metode sterilisasi menggunakan autoclave atau disebut dengan pemanasan basah. Suhu dan tekanan tinggi yang diberikan kepada alat dan media yang disterilisasi memberikan kekuatan yang lebih besar untuk membunuh sel dibanding dengan udara panas. Biasanya untuk mesterilkan media digunakan suhu 121°C dan tekanan 15 lb/in2 (SI = 103,4 Kpa) selama 15 menit. Alasan digunakan suhu 121°C atau 249,8°F adalah karena air mendidih pada suhu tersebut jika digunakan tekanan 15 psi. Untuk tekanan 0 psi pada ketinggian di permukaan laut (sea level) air mendidih pada suhu 100°C, sedangkan untuk autoclave yang diletakkan di ketinggian sama, menggunakan tekanan 15 psi maka air akan memdididh pada suhu 121°C. Ingat kejadian ini hanya berlaku untuk sea level, jika dilaboratorium terletak pada ketinggian tertentu, maka pengaturan tekanan perlu disetting ulang. Misalnya autoklaf diletakkan pada ketinggian 2700 kaki dpl, maka tekanan dinaikkan menjadi 20 psi supaya tercapai suhu 121°C untuk mendidihkan air. Semua bentuk kehidupan akan mati jika dididihkan pada suhu 121°C dan tekanan 15 psi selama 15 menit.

Autoklaf digunakan sebagai alat sterilisasi uap dengan tekanan tinggi. Penggunaan autoklaf  untuk sterilisasi, tutupnya jangan  diletakkan sembarangan dan dibuka-buka karena isi botol atau tempat medium akan meluap dan hanya boleh dibuka ketika manometer menunjukkan angka 0 serta dilakukan pendinginan sedikit demi sedikit. Medium yang mengandung vitamin, gelatin atau gula, maka setelah sterilisasi medium harus segera didinginkan. Cara ini untuk menghindari zat tersebut terurai. Medium dapat langsung disimpan di lemasi es jika medium sudah dapat dipastikan steril (Dwidjoseputro, 2005).

Adapun tujuan dari sterilisasi agar bakteri, kuman - kuman yang menempel di alat - alat laboratorium menjadi steril dan bersih. Selain, itu juga 

2.2. Macam - Macam Sterilisasi

Menurut Hogg (2005) hal yang perlu dipertimbangkan dalam memilih metode sterilisasi yaitu sifat bahan yang akan disterilkan. Metode sterilisasi antara lain :

2.2.1. Sterilisasi secara fisik

Sterilisasi secara fisik dipakai selama sterilisasi dengan bahan kimia tidak akan berubah akibat temperatur tinggi atau tekanan tinggi. Cara membunuh mikroorganisme tersebut adalah dengan panas. Panas kering membunuh bakteri karena oksidasi komponen-komponen sel. Autoclave adalah alat serupa tangki minyak yang dapat diisi dengan uap air. Pasteurisasi adalah suatu cara disinfeksi dengan pemanasan untuk mengurangi jumlah mikrooranisme tanpa merusak fisik suatu bahan.Tyndalisasi merupakan metode dengan mendidihkan medium dengan uap beberapa menit saja. Selain itu dapat dilakukan penyinaran dengan sinar gelombang pendek. 

Sterilisasi fisik juga dapat dilakukan dengan cara pemijaran (dengan api langsung) adalah membakar alat pada api secara langsung, contoh alat : jarum inokulum, pinset, batang L dan lain-lain. Panas kering adalah sterilisasi dengan oven kira-kira 160-1800C. Sterilisasi panas kering cocok untuk alat yang terbuat dari kaca misalnya erlenmeyer, tabung reaksi dan lain-lain. Uap air panas adalah konsep ini mirip dengan mengukus. Bahan yang mengandung air lebih tepat menggunakan metode ini supaya tidak terjadi dehidrasi. Sinar Ultra Violet juga dapat digunakan untuk proses sterilisasi, misalnya untuk membunuh mikroba yang menempel pada permukaan interior Safety Cabinet dengan disinari lampu UV.

2.2.2. Sterilisasi secara kimia

Sterilisasi secara kimia dapat memakai antiseptik kimia. Pemilihan antiseptik terutama tergantung pada kebutuhan daripada tujuan tertentu serta efek yang dikehendaki. Perlu juga diperhatikan bahwa beberapa senyawa bersifat iritatif, dan kepekaan kulit sangat bervariasi. Zat-zat kimia yang dapat dipakai untuk sterilisasi antara lain halogen (senyawa klorin, yodium), alkohol, fenol, hidrogen peroksida, zat warna ungu kristal, derivat akridin, rosalin, deterjen.

2.2.3. Sterilisasi secara mekanik.

Sterilisasi secara mekanik dapat dilakukan dengan penyaringan. Penyaringan dengan mengalirkan gas atau cairan melalui suatu bahan penyaring.

Sterilisasi kering dilakukan menggunakan oven pensteril, karena metode sterilisasi panas kering kurang efektif untuk membunuh mikroba dibandingkan dengan sterilisasi uap. Metode ini memerlukan temperatur yang lebih tinggi dan waktu yang lebih panjang. Pada umumnya sterilisasi kering digunakan untuk senyawa-senyawa yang tidak efektif untuk disterilkan dengan uap air, seperti minyak lemak, minyak mineral, gliserin (berbagai jenis minyak), petrolatum jelly, lilin, wax, dan serbuk yang tidak stabil dengan uap air. Metode ini efektif untuk mensterilkan alat-alat gelas dan bedah. Karena tingginya suhu yang diterapkan dalam sterilisasi panas kering, maka metode ini dapat digunakan untuk alat-alat gelas yang membutuhkan keakuratan. Contohnya alat ukur dan penutup karet atau plastik.

Sterilisasi kering dilakukan menggunakan oven pensteril, karena metode sterilisasi panas kering kurang efektif untuk membunuh mikroba dibandingkan dengan sterilisasi uap. Metode ini memerlukan temperatur yang lebih tinggi dan waktu yang lebih panjang, sterilisasi panas kering biasanya ditetapkan pada temperatur 160o C sampai 170o C dengan waktu 1-2 jam. Umumnya digunakan untuk senyawa-senyawa yang tidak efektif untuk disterilkan dengan uap air, seperti minyak lemak, minyak mineral, gliserin (berbagai jenis minyak), petrolatum jelly, lilin, wax, dan serbuk yang tidak stabil dengan uap air. Metode ini efektif untuk mensterilkan alat-alat gelas dan bedah. Karena tingginya suhu yang diterapkan dalam sterilisasi panas kering, maka metode ini dapat digunakan untuk alat-alat gelas yang membutuhkan keakuratan. Contohnya alat ukur dan penutup karet atau plastik (Lukas, 2006).

Menurut Lukas (2006), kondisi yang dibutuhkan untuk sterilisasi panas kering dengan menggunakan oven steril adalah :

Ø Suhu 170° C, waktu 1 jam

Ø Suhu 160° C, waktu 2 jam

Ø Suhu 150° C, waktu 2,5 jam

Ø Suhu 140° C, waktu 3 jam

Prinsipnya adalah protein mikroba pertama-tama akan mengalami dehidrasi sampai kering. Selanjutnya teroksidasi oleh oksigen dari udara sehingga menyebabkan mikrobanya mati.

2.3. Kelebihan dan Kekurangan Sterilisasi Alat

2.3.1. Sterilisasi secara fisik

Sterilisasi secara fisik juga memiliki kelebihan, misalnya hasil kering dapat digunakan untuk bahan termostabil. Selain memiliki kelebihan sterilisasi secara fisik juga memiliki kekurangan misalnya : waktu yang dihabiskan cukup lama, penetrasi panas terbatas pada lapisan tertentu, dibutuhkan tenaga listrik yang besar.

2.3.2. Sterilisasi secara kimia

Sterilisasi secara kimia juga memiliki kelebihan, misalnya : dapat membunuh mikoorganime dan spora, mensterilkan bahan - bahan, mensterilkan obat serbuk, sterilisasi alat -alat medis. 

2.3.3. Sterilisasi secara mekanik

Sterilisasi secara mekanik juga memiliki kelebihan, misalnya : mensterilkan mikoorganisme. Selain memiliki kelebihan sterilisasi secara fisik juga memiliki kekurangan misalnya : biaya yang mahal serta filter yang mudah mampat akibat filtrat tertinggal pada saringan sehingga harus sering diganti, membram filter tidak dapat digunakan untuk menyaring virus, tidak dapat membunuh mikroba. 

 BAB 3

PELAKSANAAN PRAKTIKUM

3.1. Waktu dan Tempat

Praktikum ini dilaksanakan pada hari Selasa tanggal 23 Februari 2016, pukul 14.20-16.30 WIB yang bertempat di Laboratorium Laboratorium Bersama Program Studi Budidaya Perairan dan Teknologi Hasil Perikanan, Fakultas Pertanian, Universitas Sriwijaya.

3.2. Alat, Bahan dan Metoda

3.2.1. Alat

Adapun alat - alat yang digunakan pada praktikum, diantaranya :

Tabel 3.1. Alat-alat yang akan digunakan dalam praktikum

No.	Nama Alat	Spesifikasi	Fungsi
1.	Bunsen	1	Membakar zat atau memanaskan larutan
2.	Cawan petri	1	Sebagai wadah untuk membiakkan sel
3.	Jarum Ose	1	Digunakan untuk memindahkan mikroorganisme yang akan dibiakkan.
4.	Hot Plate	1	Untuk memanaskan suatu zat
5.	Oven	1	Untuk sterilisasi
6.	Autoclave	1	untuk mensterilkan alat-alat laboratorium seperti cawan petri.

3.2.2. Bahan

Adapun bahan - bahan yang digunakan seperti : 

Tabel 3.2. Bahan-bahan yang akan digunakan dalam praktikum

No.	Nama Bahan	Spesifikasi	Fungsi
1.	Alkohol	Secukupnya	Untuk mensterilkan tangan dan alat-alat laboratorium
2.	Aquadest	Secukupnya	Sebagai pelarut larutan
3.	Spritus	Secukupnya	Sebagai bahan bakar bunsen

3.2.3. Metoda

Metode yang digunakan dalam praktikum ini sebagai berikut :

1. Menyemprotkan alkohol 70% ke dua tangan dan sekitar area sterilisasi

2. Mensterilkan cawan petri dengan memutarnya dekat bunsen

3. Menggoreskan jarum ose ke dalam cawan petri

BAB 4

HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1. Hasil

Adapun hasil yang didapat dari praktikum sterilisasi alat adalah sebagai berikut :

Alat-alat dalam mikrobiologi akuatik beserta fungsinya

No	Metode Sterilisasi	Nama Alat untuk  Steriliasi	Prosedur Penggunaan	Peralatan Mikrobio - logi yang disterilkan	Gambar
1.	Sterilisasi Fisik	Bunsen	Siapkan alat dan bahan yang akan di sterilisasikan. Lalu, nyalakan api pada bunsen. Setelah itu panaskan cawan petri disamping bunsen dan sambil diputar sedikit demi sedikit cawan petri tersebut. Kemudian, bakar jarum ose sampai kemerahan. Setelah itu buka sedikit cawan petri dan goreskan jarum ose yang telah dipanaskan tadi ke dalam cawan petri. Kemudian, tutup kembali cawan petri tersebut.	Cawan petri
2.	Sterilisasi Mekanik	Kertas Saring	Sterilisasi dengan metode ini menggunakan suatu saringan yang berpori   sangat   kecil  (0,22  mikron  atau  0,45  mikron)  sehingga mikroba tertahan pada saringan tersebut. Proses ini ditujukan untuk sterilisasi bahan yang peka terhadap panas.
3.	Sterilisasi Kimiawi	Alkohol Botol Semprot	1.Siapkan peralatan yang akan digunakan dalam pensenterilan 2.Alat-alat yang akan disterilkan adalah cawan petri dan tabung reaksi 3.Semprotkan cawan petri dan tabung reaksi dengan menggunakan alcohol 70% 4.Bersihkan dan keringkan dengan menggunakan tisu 5.Kedua alat tersebut kemudian dipanaskan diatas api 6. Kemudian kedua alat tersebut masing-masing dibungkus dengan menggunakan kertas A4 dengan keadaan rapi dan benar-benar tertutup 7.Dan terakhir disimpan ditempat yang steril	Cawan Petri

 4.2. Pembahasan

Pada praktikum ini kita akan membahas tentang sterilisasi alat. Sterilisasi merupakan syarat utama untuk mencapai keberhasilan kerja dalam laboratorium. Andai kata medium dan alat-alat yang kita kita gunakan dalam keadaan  tidak steril, maka akan memperoleh bakteri yang kita tidak inginkan. Maka langkah pertama yang harus dilakukan sebelum menggadakan praktikum ialah mengusahakan sterilnya alat-alat perlengkapan yang akan kita lakukan untuk percobaan.

Pada proses sterilisasi basah dan kering hal yang pertama kita lakukan adalah bersihkan tangan kita dengan menggunakan alkohol 70% yang telah disiapkan. Jangan lupa semprotkan juga alkohol 70% tersebut diatas meja tempat kita meletakkan alat alat praktikum tujuannya supaya kuman atau bakteri yang ada mati. Setelah itu semprotkan tabung reaksi dengan menggunakan alkohol 70%, kemudian gunakan tisu untuk membersihkan tabung reaksi tersebut dan terakhir tabung reaksi tersebut dibungkus menggunakan kertas dengan keadaaan rapi dan benar-benar tertutup.

Pada alat yang kedua yaitu cawan petri, kita melakukan hal yang sama pada tabung reaksi tadi, dari menyemprotkan alkohol 70% ke meja, membersihkan tangan kita dengan alkohol tersebut, dan juga membersihkan cawan petri dengan menggunakan alkohol 70% tersebut, dan yang terakhir bungkuslah cawan petri dengan kertas dalam keadaan rapi dan benar-benar tertutup. Alat yang disterilisasi (cawan petri) dapat dikatakan steril apabila tidak ada mikroba atau kontaminan pada alat tersebut. Indikasinya dapat diketahui pada saat alat tersebut digunakan sebagai wadah untuk penempatan media atau bahan yang lain. Jadi salah satu factor yang menyebabkan terjadinya kontaminasi pada media buatan adalah tempat yang kurang steril.

Berdasarkan hasil pengamatan, alat-alat yang digunakan untuk mensterilkan adalah oven dan autoclave. Oven digunakan untuk mensterilisasi alat-alat yang terbuat dari. Alat-alat gelas seperti erlenmeyer, cawan petri, tabung reaksi atau alat gelas lainnya yang ingin dipanaskan harus dibungkus dengan kertas untuk mencegah terjadi keretakan karena bertumpukkan dengan alat lainnya dan agar tidak terjadi kontaminasi pada saat pensterilan. Oven merupakan alat sterilisasi secara fisik yaitu panas kering. pemanasan kering juga bisa menggunakan alat yang disebut bunsen dan spiritus

Alat lain yang digunakan dalam sterilisasi yaitu autoclave yang berfungsi untuk sterilisasi dengan pemanasan basah. Autoclave digunakan untuk mensterilisasi alat-alat gelas, kayu, plastik, larutan dan medium yang tidak tahan terhadap suhu tinggi. pada pemanasan basah yaitu menggunakan alat yang disebut autoclave, dimana alat ataupun bahan yang akan disterilisasi tersebut akan dipanaskan dengan suhu 1210C, dengan tekanan 1-2 atm, selama 15 menit.

BAB 5

KESIMPULAN DAN SARAN

5.1. Kesimpulan

Kesimpulan dari praktikum sterilisasi yaitu kita dapat membunuh kuman dan bakteri menggunakan alkohol 70 % , menghilangkan bakteri yang ada di laboratorium. Alat-alat yang digunakan dalam praktikum harus dalam keadaan steril atau bebas dari kuman serta bakteri, virus dan jamur. Alat-alat dalam mikrobiologi akuatik terbagi menjadi alat-alat gelas dan alat-alat sterilisasi dan desinfektan, yang umumnya terbuat dari kaca pyrex. Teknik sterilisasi yang digunakan pada percobaan ini yaitu sterilisasi dengan cara kering dengan mengunakan oven (Hot Air  Sterilizer) dan Bunsen serta sterilisasi basah dengan menggunakan autoclave. Temperatur yang digunakan untuk sterilasasi alat-alat dengan autoclave 121°C

5.2. Saran

Pada saat asisten menjelaskan cara sterilisasi alat praktikum, sebaiknya praktikan memperhatikan dengan baik, supaya pada saat menggunakan alat praktikum tidak terjadi kesalahan dalam melakukan suatu percobaan atau praktikum.

DAFTAR PUSTAKA

Herdiana, N. 2006. Penuntun Praktikum Dasar-Dasar Mikrobiologi Akuatik.

Universitas Sriwijaya. Indralaya.

Iman, M. S. 2010. Sterilisasi dan Pembuatan Media Mikroba. Program Studi Teknik Lingkungan Fakultas Teknik Universitas Lambung Mangkurat : Banjarbaru.

Meliawaty. 2012. Efisiensi Sterilisasi Alat Bedah Mulut melalui Inovasi Oven  dengan Ozon dan Infrared. Jurnal Sterilisasi 2012. 11(2): 147-167.

Soerawidjaja, Tatang. 2005. Manfaat Pengenalan Alat-alat Praktikum. Bandung.  Gramedia. 

Suryawiris. 2005. Pengantar Mikrobiologi. Jakarta. Erlangga. 

Bhima, 2010. Mikrobiologi Umum. MalangUniversitas. Muhammadiyah

Hadieotomo. 1993. Dasar-dasar Mikrobiologi. Jakarta. Djambatan

Lay, B. W. dan Hastowo. 1982. Mikrobiologi. Jakarta. Rajawali Press.